cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細(xì)胞試劑盒

cisbio 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 細(xì)胞試劑盒

概述：磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測能夠檢測組蛋白 H3 尾部的 Ser10 磷酸化，組蛋白 H3 是基因表達(dá)和有絲分裂的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子。Ser10 的磷酸化與有絲分裂和減數(shù)分裂期間的染色體濃縮密切相關(guān)。

磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 檢測可測量在 Ser10 位點(diǎn)磷酸化的組蛋白 H3。與 Western Blot 不同，該檢測基于平板，不需要凝膠、電泳或轉(zhuǎn)移。磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測使用 2 種標(biāo)記抗體：一種帶有供體熒光團(tuán)，另一種帶有受體。選擇第一種抗體是因?yàn)樗芴禺愋越Y(jié)合蛋白質(zhì)上的磷酸化基序，第二種是因?yàn)樗軌颡?dú)立于蛋白質(zhì)的磷酸化狀態(tài)識(shí)別蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)磷酸化能夠形成涉及標(biāo)記抗體的免疫復(fù)合物，并使供體熒光團(tuán)靠近受體，從而產(chǎn)生 FRET 信號。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 2 板檢測方案

2 板協(xié)議涉及在裂解前在 96 孔板中培養(yǎng)細(xì)胞，然后將裂解物轉(zhuǎn)移到 384 孔低體積檢測板，然后添加磷酸組蛋白 H3 (Ser10) HTRF 檢測試劑。該協(xié)議使細(xì)胞的生存能力和匯合度得到監(jiān)測。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 1 板測定方案

使用 HTRF 試劑檢測磷酸化組蛋白 H3 (Ser10) 可以在用于培養(yǎng)、刺激和裂解的單個(gè)板中進(jìn)行。無需洗滌步驟。這種 HTS 設(shè)計(jì)的協(xié)議可實(shí)現(xiàn)小型化，同時(shí)保持穩(wěn)健的 HTRF 質(zhì)量。

HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 檢測與蛋白質(zhì)印跡法的比較

將指數(shù)生長的 Hela 細(xì)胞培養(yǎng)至 80% 匯合度，并用諾考達(dá)唑處理 16 小時(shí)。培養(yǎng)基去除和裂解后，通過離心收集可溶性上清液。等量的裂解物用于 WB 和 HTRF 的并排比較。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。使用 HTRF 磷酸組蛋白 H3 (Ser10)，僅 256 個(gè)細(xì)胞就足以進(jìn)行最小信號檢測，而 Western Blot 信號則需要 6,400 個(gè)細(xì)胞。HTRF 檢測的靈敏度是 Western Blot 的 25 倍。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為細(xì)胞增殖的有絲分裂生物標(biāo)志物

將 Hela 和 A431 細(xì)胞接種在 96 孔板中，并用 Nocodazole 處理 16 小時(shí)，Nocodazole 是一種抗有絲分裂劑，可解聚微管并在組蛋白 H3 Ser10 磷酸化達(dá)到最大時(shí)阻斷細(xì)胞有絲分裂。去除細(xì)胞培養(yǎng)基后，加入 50 µl、100 µl 或 200 µl 裂解緩沖液孵育 30 分鐘。將 16 µl 的每種裂解物轉(zhuǎn)移到 384sv 白板上進(jìn)行 HTRF 分析。將裂解體積增加至 200µl 可改善 HTRF 檢測信號的線性度。

磷酸組蛋白 H3 (Ser10) 作為極光激酶 B 抑制的讀數(shù)

細(xì)胞周期中的磷酸組蛋白 H3-Ser10

總體組蛋白磷酸化在細(xì)胞周期期間波動(dòng)非常顯著，其特征在于有絲分裂中絲氨酸 10 上組蛋白 H3 磷酸化的峰值。極光激酶 B 直接負(fù)責(zé)有絲分裂組蛋白 H3 Ser10 磷酸化。與 BORA 復(fù)合的 Aurora 激酶 A 負(fù)責(zé)在 G2 期初始激活 PLK1，導(dǎo)致在 G2/M 轉(zhuǎn)換檢查點(diǎn)激活細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶 1 有絲分裂進(jìn)入。極光激酶 A 在人類癌癥中經(jīng)常被擴(kuò)增，極光激酶 A 在人類腫瘤中的過度表達(dá)與不良預(yù)后和基因組不穩(wěn)定相關(guān)。此外，極光激酶 B 的高表達(dá)水平與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、卵巢癌和肝細(xì)胞癌的不良預(yù)后相關(guān)。