多年來，已經(jīng)開發(fā)了許多技術，使科學家能夠提出和回答這些問題。一種非常古老的技術是血細胞計數(shù)器，它允許科學家手動計數(shù)指定體積的細胞。簡單地說，血球計數(shù)板上的不同網(wǎng)格和正方形由精確的表面積定義。表面積乘以網(wǎng)格上方蓋玻片的高度可提供仔細指定的體積。

血細胞計數(shù)器的不精確性是由一些因素引起的，而更現(xiàn)代的技術已經(jīng)改進了這些因素。例如，依賴人類對網(wǎng)格上微小對象的解釋會引入用戶之間的差異，而多年的經(jīng)驗會進一步分層。玻片的缺陷加工意味著腔室高度很少是真正的 100 μm，這給方程式增加了可能導致與真實計數(shù)總體偏差的假設。

細胞計數(shù)的現(xiàn)代解決方案

自動細胞計數(shù)儀

像 CellDrop 這樣的自動細胞計數(shù)儀通過利用算法每次都以*全相同的方式計數(shù)來克服這些挑戰(zhàn)。CellDrop 的 DirectPipette™ 技術還利用高精度電機來設置 100 μm 的精確腔室高度，每次都幾乎都美。自動細胞計數(shù)儀還受益于快速圖像采集，消除了用戶偏差并顯著提高了實驗之間的一致性。

流式細胞儀

流式細胞術細胞計數(shù)的另一種現(xiàn)代解決方案是流式細胞儀。流式細胞儀通過毛細管攝入細胞，然后以單列排方式通過一系列激光使每個細胞快速分析大量單個細胞。這些激光器除了檢測前向散射（細胞直徑）和側向散射（細胞密度或體積）外，還檢測與細胞表面結合的熒光團。

流式細胞術可實現(xiàn)高通量分析，快速表征數(shù)千至數(shù)百萬個細胞，促進高效數(shù)據(jù)采集。通常，分析設置為一直運行，直到達到指定的單元數(shù)，例如 100 萬個單元。靶向表面蛋白的熒光抗體使研究人員能夠闡明不同亞群中細胞的百分比，從而識別分析的總樣品中的各種細胞類型。

流式細胞儀在細胞計數(shù)中的局限性

與任何技術一樣，流式細胞儀也有局限性。雖然流式細胞儀在了解有多少事件通過內(nèi)部檢測器方面非常出色，但了解包含這些事件的精確進樣體積不太容易測量。對于某些流式細胞儀，內(nèi)部流體泵可以每年校準一次，以確保進樣體積足夠精確，從而獲得準確的細胞計數(shù)。通常，泵不易校準或根本不校準，這可能導致細胞/mL 定量不準確。此外，傳統(tǒng)的流式細胞儀通常無法提供空間信息或詳細的單細胞圖像。

互補技術：流式細胞術和成像

為了克服這些限制，專家們通常用成像流式細胞術來補充流式細胞術。成像流式細胞儀將高分辨率圖像捕獲與傳統(tǒng)流式細胞術原理相結合，可實現(xiàn)詳細的流式細胞術圖像分析。這提供了有價值的空間信息和跨細胞群熒光強度的量化，從而顯著增強了細胞分析能力。成像流式細胞術還可以清楚地區(qū)分紅細胞和有核細胞，這對于準確的細胞計數(shù)至關重要。

許多流式細胞術專家使用的另一種實用解決方案是在流式細胞儀上測量之前，使用另一種方法（例如自動細胞計數(shù)儀）對細胞進行計數(shù)。它結合了兩種技術的優(yōu)勢，可提供精確的定量和詳細的表征。

使用熒光活力染料（如 AO/PI）對細胞進行計數(shù)可產(chǎn)生清晰的熒光圖像，從而直觀地確認細胞活力狀態(tài)。